ELISA試劑盒備案參考評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線
ELISA試劑盒定量方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成，測(cè)定次數(shù)不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。
定性方法：工作濃度范圍通過陰性、臨界值濃度和陽性的樣品測(cè)定來確定，每個(gè)濃度重復(fù)不少于5次，濃度與響應(yīng)值之間應(yīng)有一定的關(guān)系。
2、檢測(cè)限和定量限
檢測(cè)限：20份空白樣品測(cè)定均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。
定量限：應(yīng)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線中zui低濃度點(diǎn)。對(duì)于定量方法，應(yīng)對(duì)該濃度樣品至少測(cè)定6次進(jìn)行驗(yàn)證，而不能通過外延法推斷。
3、臨界值（cut-off值）的確定
對(duì)于有zui高殘留*的藥物，檢測(cè)方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測(cè)定的均值減去1.64倍標(biāo)準(zhǔn)差，即95%置信限處。
對(duì)于禁用藥物，檢測(cè)方法的臨界值為定量限，該值應(yīng)達(dá)到*的指標(biāo)。
4、精密度和準(zhǔn)確度
ELISA試劑盒對(duì)于有zui高殘留*的藥物，添加濃度為MRL及MRL上下各一個(gè)濃度；對(duì)于禁用藥物，添加濃度為定量限和2倍定量限，每個(gè)添加濃度至少測(cè)定5個(gè)平行樣，并至少進(jìn)行3批實(shí)驗(yàn)（不同檢測(cè)日期，不同標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同批次試劑盒）。
（1）準(zhǔn)確度：回收率范圍大于40%或符合相應(yīng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（2）精密度：以變異系數(shù)表示。
批內(nèi)變異系數(shù)：每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%，對(duì)于禁用藥物小于或等于30%.
批間變異系數(shù)：所有樣品之間的變異系數(shù)值小于或等于30%，對(duì)于禁用藥物小于或等于40%.
定性方法：陰性和陽性樣品各測(cè)定不少于50份，確定假陽性率和假陰性率。
5、交叉反應(yīng)
試劑盒與待檢藥物類似物、代謝物或共同存在的藥物測(cè)定交叉反應(yīng)率。
6、保存期
保存期通過保存條件的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果確定。
7、ELISA試劑盒復(fù)核試驗(yàn)
復(fù)核試驗(yàn)主要內(nèi)容應(yīng)包括：
（1）定量方法：檢測(cè)限、IC50以及至少兩個(gè)添加濃度的準(zhǔn)確度和精密度，并與理化方法（或與具代表性進(jìn)口試劑盒）比較。
（2）定性方法：檢測(cè)限、假陽性率和假陰性率。